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冻存细胞复苏步骤

1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后，将其中的混合液移至离心管中，1000rmp，5分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液（操作时 小心，切勿将细胞沉淀移去）。

3. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。

4. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

复苏细胞：

1.   将细胞冻存管由液态氮中取出，置于37度水浴快速溶解回温。此时可准备培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

2.   于生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

3.   先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。

4.   倒去上清液，以新鲜培养基重悬细胞，移到培养瓶中培养。

5.   隔天更换新鲜培养基，并观察细胞存活状况。

细胞复苏操作方法

2.1从液氮罐取出冻存细胞，立即放入37℃水浴锅或其他细胞复苏设备中，快速融化。

2.2准备离心管，加入2倍冻存细胞体积的细胞培养基，待冻存管中细胞完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中。

2.3 1200-1500rpm 5min离心，弃上清。

2.4加入适量新鲜培养基，使用移液管缓慢悬浮细胞，并将细胞转染细胞培养皿/瓶中，显微镜下观察细胞状态，放入细胞培养箱中培养。

2.5 24h后观察细胞状态，并更换新鲜细胞培养液。

细胞冻存案例：

A431（人0皮肤基底细胞***）、LOVO（人结肠0***细胞）、Jecket、 MH-s（肺泡巨噬细胞）、THP1 人单核细胞型淋巴0瘤、PBMC 、HTR-8、tccsup、293T、293FT、HCT-8、RPTEC、L-WRN、MRC-5、huh7、lm6、MCF-7、MDA-MB-231、MV4-11、MOLM-13、U937、HL60、TG-1、BaF3、32D、牙齿干细0胞、英文名是stem cells from apical papilla 、h460、bxpc3、panc1、patu8988、cfpac1。aspc1（人转移胰0腺0***细胞） 人的外周血细胞、单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、monocyte（单核细胞）、Neutrofile、MEF、B16、Hela、HepG2（人肝0***细胞）、RKO（人低分化的结肠0***细胞）、HCT116（人结肠0***肿0瘤细胞）、N2A（Neuro-2a小鼠来源***瘤母细胞）、脂肪细胞、3T3-L1（小鼠胚胎成纤维细胞）