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发布时间:2022-07-21 16:49:50
甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白,分子量约70,000~72,000道尔顿^,在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成,正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先0天性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。因此制备高0效特异的AFP单克0隆抗0体(McAb)具有重要的意义。
抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献[10]制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的,37 ℃ 培养过夜,次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养,当菌液 OD600达 0. 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG,37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验,有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG,37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品,超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化,考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ,可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
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甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白,分子量约70,000~72,000道尔顿^,在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成,正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。
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